БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 6, с. 1026–1035
Гетерогенность препаратов тирозиназы, выделенных из кожи крыс, кожи и меланомных опухолей человека
Поступила в редакцию 03.09.1990
Аннотация
Из кожи крысы выделен гомогенный по данным электрофореза препарат тирозиназы с молекулярной массой 61 кДа. Очистку проводили в основном в четыре стадии разделения солюбилизированных тритоном Х-100 белков: гель-фильтрация, анионообменная хроматография и две последовательные аффинные хроматографии. Изоэлектрическим фокусированием показано, что препарат содержит девять изоформ, обладающих L-ДОФА-оксидазной активностью, основными из которых являются белки с pI 4,26 и 4,33. Удельная активность препарата составляла 43 нмоль/мин на 1 мг белка. Эпидермис кожи человека фактически не обладает L-ДОФА-оксидазной активностью, что связано не только с отсутствием тирозиназы, но и с присутствием большого количества белка с молекулярной массой 66 кДа, который частично блокирует путь превращения L-ДОФА в ДОФА-хром, по образованию которого судили о скорости L-ДОФА-оксидазной реакции в белковых препаратах. Препарат тирозиназы, выделенный из меланомы человека, состоял из двух изоформ — 48 и 69 кДа, которые при изоэлектрическом фокусировании,проявляли высокую гетерогенность в области pI 3—5. Удельная активность препарата из меланом существенно превышала активность тирозиназы из нормальной кожи человека и крысы и составляла 290 нмоль/мин на 1 мг белка.