БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 4, с. 687–693
Гибридазное расщепление РНК. III. Использование УФ-спектроскопии для изучения кинетических свойств РНКазы H из E. coli
Поступила в редакцию 11.07.1990
Аннотация
Разработан одностадийный метод определения активности рибонуклеазы Н из Е. coli, основанный на непрерывной регистрации увеличения УФ-поглощения субстрата в ходе реакции. Найден оптимальный субстрат для изучения ферментативной активности, представляющий собой гетеродуплекс Am-dT20 (т=18-24). Проведено сравнение скорости ферментативной реакции, определяемой методами УФ-спектроскопии и ион-парной ВЭЖХ. Впервые получены кинетические параметры гидролиза Аm в гибридном дуплексе Am-dT20, катализируемого РНКазой Н из Е. coli: Km—44±11 нМ и Vmax=0,0363±0,0053 Е. Чувствительность метода составляет 0,01—0,05 Е, что позволяет определять РНКазу Н в концентрации 0,5-2,5 ед/мл.