БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 3, с. 552–559
Расщепление субстратов конкатемерного типа эндонуклеазами рестрикции MvaI и SsoII
Поступила в редакцию 29.06.1990
Аннотация
С целью выявления общих принципов функционирования эндонуклеаз рестрикции изучено взаимодействие ферментов SsoII (↓CCNGG) и MvaI (CC↓a/tGG)c ДНК-дуплексами конкатемерного типа, примененными ранее в исследованиях эндонуклеазы EcoRII (↓CCa/tGG). При гидролизе ДНК-дуплексов, содержащих АА- и ТТ-пары в центральном положении участка узнавания, наблюдается общая для всех трех ферментов тенденция. Введение АА-пары вызывает блокирование или существенное замедление действия эндонуклеаз, в то время как в случае ТТ-пары этот эффект отсутствует или значительно меньше. Установлено, что эндонуклеаза рестрикции SsoII, так же как и EcoRII, процессивно расщепляет конкатемерные субстраты и взаимодействует (или сближена) с атомом водорода в пятом положении внешнего остатка dC участка узнавания. Обнаружено, что эндонуклеазы MvaI и EcoRII по-разному узнают и расщепляют одну и ту же нуклеотидную последовательность. Молекула MvaI, связанная с субстратом, не способна к линейной диффузии вдоль ДНК. Эффективный гидролиз dU- и m5dС-содержащих полимеров исключает участие в белково-нуклеиновом узнавании гидрофобных контактов этого фермента с метильной группой остатка dT и атомом водорода в пятом положении внешнего остатка dC участка узнавания.