БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 3, с. 467–476
Особенности аффинной модификации миозиновой АТРазы под действием моноальдегидного производного ADP
Поступила в редакцию 15.06.1990
Аннотация
Показано, что высокоочищенное моноальдегидное производное ADP (монооксо-ADP, —(2’R, 4’S)-2′-(6-аминопуринил – 9) -4′-гидроксиметил-3’окса-1′-оксопентил-5′-дифосфат), полученное путем частичного восстановления диальдегидного производного ADP, является эффективным необратимым ингибитором Са-АТРазной активности субфрагмента 1 («головок») миозина. Ингибирование носит характер аффинной модификации, что подтверждается наличием кинетики насыщения по концентрации мoнooкco-ADP и проявлением эффекта защиты от ингибирования негидролизуемым аналогом субстрата миозиновой АТРазы — аденилилимидодифосфатом (АМР-PNP). Наличие в среде ионов Mg2+ (но не Са2+!) при взаимодействии субфрагмента 1 с mohookco-ADP полностью предотвращает ингибирование АТРазной активности вне зависимости от условий ее определения (Са-АТРаза, Mg-АТРаза или К, ЭДТА-АТРаза). И наоборот, субфрагмент 1, модифицированный в отсутствие ионов Mg2+, демонстрирует одинаковую степень ингибирования для всех трех видов АТРазной активности. Неожиданным эффектом, не показанным ранее для каких-либо других аффинных аналогов миозиновой АТРазы, является сохранение активности у половины активных центров в случае, если модификации под действием мoнooкco-ADP подвергается не субфрагмент 1, а «двухголовые» формы фермента — тяжелый меромиозин (ТММ) или сам миозин. Характерно, что процесс аффинной модификации характеризуется при этом теми же величинами констант, что и в случае субфрагмента 1 (Ki = ( 3,3—3,5)•10- 4 М, ki= 0,03—0,04 мин-1). Этот факт может рассматриваться как доказательство функциональной асимметрии миозиновых головок в молекуле миозина, обусловленной, возможно, экранированием одной головкой активного центра другой.