БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 2, с. 230–240
Субстратная специфичность сериновой протеиназы Bacillus subtilis, шт. 72
Поступила в редакцию 05.07.1990
Аннотация
Проведено сравнительное изучение каталитического действия сериновой протеиназы Bacillus subtilis, шт. 72 при гидролизе различных n-нитроанилидных субстратов типа Z-A2-A1-pNA, Z-A3-A2-A1-pNA, Z-A4-A3-A2-A1-pNA (A1—Аn—различные аминокислотные остатки, Z — бензилоксикарбонильная, pNA — n-нитроанилидная группировки). Найдено, что в зависимости от структуры субстрата расщепление может происходить как по связи пептид-n-нитроанилин, так и по связи аминокислота — аминокислота. Проведен анализ кинетической схемы процесса для случая гидролиза субстрата по этим двум связям одновременно. Выявлен физико-химический смысл определяемых кинетических параметров данной схемы и установлено, что параметров, вычисляемых при анализе кинетической кривой отщепления n-нитроанилина, вполне достаточно для количественной характеристики специфичности фермента как по одной, так и по другой расщепляемой связи. Найдено, что различные аминокислотные остатки, находящиеся в положении А1, можно расположить в следующий ряд по специфичности: L-Leu > L-Phe > L-Nle > L-Ala. Аминокислотные радикалы, разветвленные в β-положении (L-Val и L-lle), совсем не связываются в подцентре S1. Если они занимают положение А1, расщепление субстрата происходит исключительно между остатками А1 и А2. Исследованные тетрапептидные N-защищенные n-нитроанилидные субстраты также гидролизуются только по этой связи. Частичное расщепление связи аминокислота — аминокислота между остатками А1 и А2 происходит, если с подцентром S1 плохо связывается аминокислотный остаток А1 и/или с подцентром S1 хорошо связывается аминокислотный остаток А2.