БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 12, с. 2226–2238
УДК 577.152.3
Внутриклеточная аминопептидаза из Xanthomonas rubrilineans, гидролизующая эфиры α-аминокислот и цефалексин
Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков, Москва
Химический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 05.03.1990
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: аминопептидаза, X. rubrilineans, гидролиз эфиров α-аминокислот, цефалексин.
Аннотация
Аминопептидаза выделена из бесклеточного экстракта Xanthomonas rubrilineans осаждением белков изопропиловым спиртом с последующей очисткой методами аффинной хроматографии на CABS-сефарозе, бацитрацин-сефарозе, гель-фильтрации на сефадексе G-200 и ультрафильтрации. Общий выход по активности составил 32%, степень очистки 2200 раз. Полученный фермент гомогенен по данным электрофореза. Наряду с широким спектром пептидазной активности аминопептидаза обладает гидролизной активностью по отношению к β-лактамным антибиотикам, эстеразной — к эфирам L- и D-аминокислот, катализирует реакцию ацильного переноса при синтезе , цефалексина из эфира D-фенилглицина и 7-аминодезацетоксицефалоспорановой кислоты. Максимальная активность аминопептидазы по гидролизу L-Ala-pNA и цефалексина проявляется при pH 6,5, фермент стабилен в диапазоне pH 4,0—8,0. Активность ингибируется o-фенантролином, n-хлормеркурбензоатом, ацетатом ртути и N-бромсукцинимидом. Молекулярная масса аминопептидазы 270—280 кДа. Фермент является тетрамерным белком с молекулярной массой субъединиц 70 ± 2 кДа. Изоэлектрическая точка аминопептидазы 6,8. Определен аминокислотный состав фермента: Asp63, Thr33, Ser32, Glu72, Gly55, ½Cys3—4, Val45, Ile24, Leu53, Tyr23, Phe24, Lys23, His16, Arg36, Pro60, Met25, Ala55.