БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 12, с. 2163–2170
УДК 575.11
Исследование аффинных характеристик моноклональных антител в методе твердофазного иммуноферментного анализа
Научный центр молекулярной диагностики МЗ СССР, Москва
Поступила в редакцию 25.01.1990
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: моноклональные антитела, метод твердофазного иммуноферментного анализа.
Аннотация
Предложен простой способ исследования константы связывания (Kсв) моноклональных антител иммобилизованным антигеном в непрямом методе твердофазного иммуноферментного анализа. В соответствии с методикой оценивается интенсивность развития окраски (A405) пероксидазной реакции, развиваемой конъюгатом на комплексе антиген—антитело, для различных концентраций (c0) антител. В классических координатах Скэтчарда изучается зависимость A405/c = f(A405) для всего диапазона концентраций моноклональных антител и рассчитывается тангенс угла наклона (tgα = Kсв) линейного участка. Способ расчета Kсв использован при тестировании мышиных BALB/C моноклональных антител (G1) против инсулина свиньи, продуцируемых различными гибридомами, а также при оценке воздействия на МА pH среды, температуры, гидрофобизации. Установлено, что максимально детектируемая концентрация (чувствительность) в ИФА-методе зависит от Kсв МА. Исследование аффинных характеристик МА предлагаемым способом может найти применение в иммунодиагностике при оценке концентраций антигена или антитела в биологических средах, при оценке эффективности препаратов векторного действия, в которых диагностический или терапевтический компонент конъюгирован с вектором (МА или F(ав)-фрагмент), обеспечивающим доставку препарата к биомишеням.