БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 11, с. 2002–2010
УДК 577.175.4
Специфическое связывание иодтиронинов с аполипопротеином A-1 в составе липопротеидных частиц высокой плотности, выделенных из сыворотки человека аффинной хроматографией на тироксин-сефарозе
Институт биоорганической химии АН БССР, Минск
Поступила в редакцию 16.01.1990
После доработки 11.06.1990
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: липопротеин высокой плотности, аполипопротеин A-1, иодтиронины, тироксин, связывание.
Аннотация
Изучены кинетические и равновесные характеристики взаимодействия тироксина (T4) и его структурных аналогов с фракцией липопротеидных частиц высокой плотности (ЛВП), выделенной из сыворотки крови человека с помощью аффинной хроматографии на T4-сефарозе и содержащей аполипопротеин A-1 (апоA-1) в качестве единственного белкового компонента. Связывание [125I]T4 с апоA-1-ЛВП достигало максимума через 40 мин и не изменялось в течение последующих 80 мин инкубации при 0—2°. Диссоциация комплекса, вызванная введением в систему избытка немеченного T4, протекала во времени более интенсивно при 22°, чем при 0-2°. Инкубация апоA-1-ЛВП с возрастающими количествами T4 показала, что связывание имеет насыщаемый характер. Анализ экспериментальных данных с помощью различных компьютерных программ выявил наличие в апоA-1-ЛВП одного типа участков связывания с Ka = (4,0 ± 2,1) · 107 М−1 и Bмакс = 1,7 ± 8 ммоль T4 на 1 мг белка. Природные иодтиронины, их аналоги и D-изомеры тиреоидных гормонов конкурировали с [125I]T4 за участки связывания на апоA-1-ЛВП, причем их ингибирующее действие уменьшалось в следующем ряду: L-T4 = D-T4 ≥ 3,3′,5-трииод-L-тиронин = 3,3′,5-трииод-D-тиронин > 3,5-дииод-L-тиронин = 3,3′,5-трииодтироуксусная кислота > 3,3′,5-трииодтиропропионовая кислота >> 3,5-дииод-L-тирозин. Обратимый ингибирующий эффект на комплексообразование [125I]T4 с апоA-1-ЛВП оказывали 8-анилин-1-нафталинсульфокислота (10−6—10−5 М), мертиолат (10−6—10−5 М), трихлорацетат (10−2 М) и pH 5,0, тогда как 3 М гуанидинхлорид, 2,5 М NaCl и pH 3,0 необратимо инактивировали апоA-1-ЛВП. Сделан вывод, что связывание иодтиронинов с апоA-1-ЛВП является зависимым от времени, насыщаемым, обратимым, селективным и чувствительным к специфическим ингибиторам процессом взаимодействия с участком белка, структурно комплементарным лиганду, а не простым включением неполярных соединений в липидную часть макромолекулы.