БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 10, с. 1819–1825
УДК 577.152.1
Кинетические исследования механизма снятия субстратного ингибирования лактатдегидрогеназы анионами и pH
Институт биологической физики АН СССР, Пущино Московской обл.
Институт биологии Казанского филиала АН СССР, Казань
Поступила в редакцию 03.10.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: кинетика, лактатдегидрогеназа, ингибирование, анионы, pH.
Аннотация
Исследован механизм регуляции лактатдегидрогеназы (ЛДГ) анионами и pH в условиях ингибирования фермента субстратом — пируватом при его концентрациях, превышающих величину Km. Исходя из уравнения для скорости, полученного из кинетической схемы реакции, вычислены эффективные константы диссоциации Kд эф для анионов Cl− и I−. Из графиков зависимости Kд эф от концентрации пирувата определили истинные значения Kд для Cl− и I− — 50 и 27 мМ соответственно. Полученные данные позволяют утверждать, что регуляция ЛДГ анионами Cl− возможна in vivo. Тот же подход, примененный к случаю снятия субстратного ингибирования при повышении pH, позволил определить истинное значение pK для протонов, влияющих на скорость реакции. Поскольку значение pH 7 необходимо и для выполнения условия обратимости реакции [1], катализируемой ЛДГ, можно утверждать, что определенный нами pK = 7,1 соответствует значению наибольшей чувствительности фермента к изменению pH. Таким образом, показано, что при pH 7 осуществляются необходимые условия регуляции изменениями pH. Нами показано отсутствие конкуренции анионов Cl− и OH−, что подтверждает независимое, аддитивное действие pH и анионов нейтральной соли. Наблюдаемая аддитивность позволяет сделать вывод об участии различных участков на ферменте в депротонизации и в связывании анионов нейтральной соли.