БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 8, с. 1387–1395
УДК 577.152.3
Сериновая протеиназа из высшего базидиомицета рода Coprinus
Институт ботаники АН АрмССР, Ереван
Ботанический институт им. В.Л. Комарова АН СССР, Ленинград
Поступила в редакцию 21.07.1989
После доработки 27.11.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сериновая протеиназа, базидиомицет Coprinus 7N, субтилизинs.
Аннотация
Из культуральной жидкости высшего базидиомицета Coprinus 7N впервые выделена внеклеточная тиолзависимая сериновая протеиназа. Схема очистки включает ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-сефарозе и аффинную хроматографию на бацитрацин-сефарозе. В результате достигнута 32-кратная очистка и получен гомогенный фермент с выходом 55%. Фермент состоит из одной полипептидной цепи с молекулярной массой 30 кДа. Аминокислотный состав протеиназы Coprinus 7N: Lys7, His7, Arg10, Asx29, Thr24, Ser30, Glx19, Pro13, Gly39, Ala40, Cys2–3, Val23, Met1–2, Ile14, Leu13, Tyr6, Phe7. Фермент имеет изоэлектрическую точку 8,5; pH-оптимум протеолитического действия по расщеплению Z-Ala-Ala-Leu-pNA 8,5. Фермент наиболее стабилен в области pH 6–9. Температурный оптимум активности находится при 37°. Фермент полностью ингибируется специфическими ингибиторами сериновых протеиназ — фенилметилсульфонилфторидом и диизопропилфторфосфатом, а также n-хлормеркурбензоатом. Протеиназа гидролизует азоказеин, азоальбумин, гемоглобин, фибрин, синтетические хромогенные пептидные субстраты Z-Ala-Ala-Leu-pNA и Z-Gly-Gly-Leu-pNA. Протеиназа Coprinus 7N по ряду свойств близка тиолзависимым сериновым протеиназам, выделенным из ряда источников — бацилл, актиномицетов, микроскопических грибов, растений, и составляющим отдельное подсемейство внутри семейства субтилизинов.