БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 6, с. 1104–1109
УДК 577.1
Влияние форболовых эфиров и ионов Ca2+ на процесс автофосфорилирования рецептора эпидермального фактора роста in vivo
Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, ПНИЛ «Химии ферментов»
Поступила в редакцию 14.04.1989
После доработки 27.06.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: моноклональные антитела, фосфотирозин, эпидермальный фактор роста, автофосфорилирование.
Аннотация
Для изучения in vivo процессов тирозинового фосфорилирования в клетках эпидермальной карциномы человека линии A431 были использованы моноклональные антитела к фосфотирозину, описанные нами ранее [1]. Инкубация клеток линии A431 в среде с эпидермальным фактором роста (ЭФР) вызывает фосфорилирование по тирозину рецептора ЭФР, содержание фосфотирозина в клеточных рецепторах ЭФР под действием фактора роста возрастает в 50—100 раз. Максимальный уровень автофосфорилирования рецепторов наблюдается спустя 5 мин после стимуляции и остается практически постоянным в течение 90 мин инкубации с ЭФР. Преинкубация клеток с форбол-12-миристоил-13-ацетатом (ФМА) или кальциевым ионофором A23187 приводит к существенному снижению степени автофосфорилирования рецепторов. В случае присутствия в среде преинкубации A23187 совместно с ЭГТА содержание фосфотирозина в клеточных рецепторах ЭФР после стимуляции фактором роста совпадает с контролем (без преинкубации с ионофором). Если клетки преинкубируются в среде, содержащей форболовый эфир и H-7, ингибитор протеинкиназы C, уровень автофосфорилирования рецепторов ЭФР практически не отличается от контрольного значения.