БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 6, с. 1094–1103
УДК 577.1
Очистка и некоторые свойства полифосфатазы клеточной оболочки дрожжей Saccharomyces carlsbergensis
Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, Пущино Московской обл.
Поступила в редакцию 04.04.1989
После доработки 19.06.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дрожжи, полифосфатаза, очистка, специфичность.
Аннотация
Полифосфатаза клеточной оболочки дрожжей S. carlsbergensis (полифосфатфосфогидролаза, КФ 3.6.1.11) получена в высокоочищенном состоянии с удельной активностью 220 Е/мг путем хроматографии экстракта клеток на фосфоцеллюлозе и QAE-сефадексе в присутствии 5 мМ MgCl2, 0,5 мМ ЭДТА и 0,1%-ного тритона X-100, стабилизирующих фермент при очистке и хранении. По данным гель-фильтрации и электрофореза в присутствии Ds-Na молекулярная масса полифосфатазы — 40000 Да. Препарат полифосфатазы гидролизует полифосфаты разной степени полимерности (в том числе и триполифосфат), слабо активен в отношении GTP и практически не расщепляет PPi, ATP и n-нитрофенилфосфат. Km(каж) при использовании в качестве субстратов триполифосфата и полифосфатов с длиной цепи n = 9 и 208 составляет соответственно 1,7 · 10−4, 1,5 · 10−5 и 8,8 · 10−7 М. Оптимальный pH действия полифосфатазы 6,0—7,5.