БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 6, с. 1052–1058
УДК 577.158.54
Биолюминесцентная система светляков. Исследование взаимодействия продукта реакции — оксилюциферина и его аналогов с люциферазой методами флуоресцентной спектроскопии
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 22.03.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: биолюминесценция, люцифераза светляков, флуоресценция, оксилюциферин.
Аннотация
Из анализа pH-зависимости спектров поглощения и флуоресценции люциферина (LH2), 6′-метоксилюциферина (H3CO-LH2), 2-CH-6′-OH-бензтиазола (BT) и оксилюциферина (LO) в водной и этанольной средах при pH 1—10 определены рК 6′-OH-группы в основном (8,5) и возбужденном (−0,5) состояниях. Методом флуоресцентного титрования измерены и определены Kd комплексов этих веществ с люциферазой (E): 11 для E-LH2, 1—2 — E-H3CO-LH2, 13 мкМ — E-BT. Выделены комплексы фермент — продукт (E-P) и фермент — оксилюциферин (E-LO). Из сравнения pH-зависимостей спектров флуоресценции оксилюциферина в воде и в комплексах E-P и E-LO со спектрами биолюминесценции сделан вывод, что в ходе окисления люциферин мигрирует по белку, в момент образования электронно-возбужденного продукта E-P диссоциирует и после испускания света продукт вновь связывается с белком, причем участок связывания продукта отличен от участка связывания LH2.