БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 5, с. 938–945
УДК 577.158
Аргининовый остаток в активном центре D-глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Участие в отдельных стадиях катализа
Межфакультетская проблемная научно-исследовательская лаборатория молекулярной биологии и биоорганической химии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова
Институт биохимии им. А.Н. Баха АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 28.02.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: D-глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, аргинин, каталитический механизм.
Аннотация
Химическая модификация одного остатка аргинина на субъединицу тетрамерной молекулы D-глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы приводит к 85—95%-ной потере активности [1, 2]. Исследование предстационарной кинетики реакции, проведенное в настоящей работе с нативным и модифицированным ферментами из пекарских дрожжей, показало, что модификация аргининового остатка вызывает 60-кратное уменьшение константы скорости реакции образования комплекса 3-фосфоглицероил-фермент · NADH. Наблюдается также 40-кратное снижение константы скорости фосфоролиза ацил-фермента. В экспериментах по конкурентному ингибированию реакции окисления 3-фосфоглицеринового альдегида в присутствии NADH получены результаты, позволяющие исключить участие аргининового остатка в дестабилизации комплекса ацил-фермент · NADH. Результаты настоящей работы экспериментально подтверждают основные положения гипотезы о роли аргининового остатка в каталитическом механизме D-глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, выдвинутой на основании рентгеноструктурных данных [3, 4], и согласуются с представлением о сходной функции этого остатка в активных центрах разных NAD+-зaвисимыx дегидрогеназ.