Идентификация и очистка GTP-связывающих регуляторных белков из плазматических мембран сердца свиньи

Аннотация

Описана методика выделения и свойства гомогенного GTP-связывающего белка 23 кДа из сарколеммы желудочков сердца свиньи. Установлено, что этот белок не способен ADP-рибозилироваться коклюшным, холерным и ботулиническим токсином C3. Коклюшный токсин ADP-рибозилирует в сарколемме сердца свиньи субъединицу G_i-белка 40 кДа, холерный токсин — субъединицу G_s-белка 45 кДа, ботулинический токсин — группу белков с молекулярными массами 22, 26 и 29 кДа. Антисыворотка, содержащая антитела на пептид, общий для α-субъединиц G_s, G_i, G₀ и G_t, не взаимодействует с очищенным белком 23 кДа сарколеммы. Обработка трипсином белка 23 кДа в присутствии гуаниловых нуклеотидов приводит к появлению фрагмента 22 кДа. Обработка трипсином гомогенной α₀-субъединицы 39 кДа мембран головного мозга быка и ADP-рибозилированной коклюшным токсином α_i-субъединицы 40 кДа сарколеммы сердца свиньи в присутствии GTPγS приводит к образованию фрагментов 37 и 38 кДа соответственно. В присутствии GTP или GDP протеолиз α₀ заканчивается образованием фрагментов 24 и 15 кДа, а продуктом протеолиза ADP-рибозилированной α_i-субъединицы 40 кДа является меченый пептид 16 кДа. Протеолиз ADP-рибозилированного ботулиническим токсином белка 26 кДа приводит (независимо от нуклеотидов) к образованию двух меченых пептидов: 24 и 17 кДа. Таким образом, полученные данные доказывают существование в сарколемме сердца свиньи GTP-связывающего белка, 23 кДа, обладающего частичной структурной гомологией с α-субъединицами классических G-белков.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: