БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 5, с. 808–813
УДК 577.352.4
Быстрый метод получения клеточных мембран тромбоцитов для радиолигандных и энзиматических исследований
Научно-исследовательский институт кардиологии М3 РСФСР, Ленинград
Поступила в редакцию 14.11.1988
После доработки 02.11.1989
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: мембраны тромбоцитовполучениегель-фильтрациясвязываниеаденозинглутаминовая кислота.
Аннотация
Предложен простой и быстрый хроматографический метод получения тотальной мембранной фракции тромбоцитов на сефарозе CI 6B. Время, необходимое для выделения мембранной фракции, составляет 25—30 мин. На колонке размером 26×150 мм за одно разделение удается получить 20—21 мг мембранного белка. Высокое качество очистки выделенных мембран было показано в радиолигандных экспериментах с применением [3H] аденозина и L-[3H] глутаминовой кислоты. Получаемый препарат по чистоте не уступает мембранной фракции, выделенной традиционной техникой ультрацентрифугирования. При помощи ферментов-маркеров плазматической, микросомальной и митохондриальной мембран установлена гомогенность мембранного пика, что позволяет получать фракции с различным содержанием белка без ущерба для воспроизводимости результатов. На примере участков высокоаффинного связывания [3H]аденозина и L-[3H] глутаминовой кислоты показана пригодность получаемого препарата мембран для рецепторных исследований.