БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 4, с. 680–686
УДК 517.158.4.12
Кинетические свойства сорбитолдегидрогеназы из цитоплазмы клеток печени теленка
Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 20.12.1988
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сорбитолдегидрогеназа, цитоплазма клеток печени, кинетика, коэффициент Хилла, кооперативность.
Аннотация
Исследовали кинетические свойства сорбитолдегидрогеназы из цитоплазмы клеток печени теленка при pH 7,0; 7,5; 8,0; 9,0; 10,0 в направлении окисления сорбита. Обнаружено, что форма кинетических кривых накопления NADH зависит от pH и концентрации субстрата. При pH 7,0; 7,5; 8,0 кривая накопления NADH подчиняется кинетике Михаэлиса — Ментен с величинами Km = 3,3 · 10−3, 2,3 · 10−3 и 2,08 · 10−3 М соответственно. При pH 9,0 и 10,0 кривые зависимости v0 от [S0] носят необычный характер (наличие «промежуточного плато»). Графики этой зависимости, построенные в координатах Хилла, выявили наличие двух коэффициентов кооперативности Хилла (nH), которые определяются концентрацией субстрата. До 2 мМ сорбита nH равны 1,0 и 1,16 при pH 9,0 и 10,0, затем при повышении концентрации сорбита коэффициент Хилла при pH 9,0 возрастает до 2,4, а при pH 10,0 — до 2,18. Это может свидетельствовать о существовании медленно диссоциирующей ферментной системы типа Np⇌P (P — олигомерная, p — мономерная формы фермента; N ≥ 2). Графики зависимости от [NAD] имели гиперболическую форму при всех исследованных величинах pH. Полученные результаты обсуждаются с позиции регулирующего действия сорбита и кислотности среды на процесс ассоциации-диссоциации сорбитолдегидрогеназы из цитоплазмы клеток печени.