БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 4, с. 625–633
УДК 577.152.3
Выделение и характеристика казеиновой киназы типа II из хрусталиков амфибии
Институт биохимии им. А.H. Баха АН СССР, Москва
Институт биологии развития АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 11.11.1988
После доработки 13.12.1988
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: казеиновая киназа II, фосфорилирование РНК-связывающихся белков.
Аннотация
Протеинкиназа, обнаруженная нами ранее среди РНК-связывающих белков клеток эпителия и корковой части хрусталика лягушки Rana temporaria, эффективно фосфорилирует казеин и неактивна в отношении гистонов; она катализирует присоединение фосфатных групп как к сериновым, так и к треониновым остаткам в молекулах казеина и использует GTP наряду с ATP в качестве нуклеотидных субстратов. Гепарин в низких концентрациях подавляет активность протеинкиназы. Эти факты позволяют отнести фермент к казеиновым киназам типа II. Предложена схема выделения фермента, приводящая к 6000—7000-кратной очистке его относительно белков безмитохондриального экстракта. В состав очищенной протеинкиназы входят две полипептидные цепи с молекулярными массами 41 и 27,5 кДа. Молекулярная масса нативного фермента, определенная методом гель-фильтрации, составляет 147 ± 5 кДа. Обе полипептидные цепи в составе энзима самофосфорилируются в стандартных условиях. CaCl2 и ЭГТА в миллимолярных концентрациях не меняют активность очищенной протеинкиназы. При анализе in vitro эндогенная казеиновая киназа II фосфорилирует главным образом группу высокомолекулярных полипептидных цепей в РНК-связывающих белках коры хрусталиков. Эти же полипептиды фосфорилируются в клетках коры хрусталика при инкубации их в присутствии [32P]ортофосфата.