БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 3, с. 554–563
УДК 547.963
cAMP-независимая протеинкиназа из хрусталиков амфибии: идентификация, анализ распределения в органе и субстраты фосфорилирования
Институт биохимии им. А.Н. Баха АН СССР
Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 11.11.1988
После доработки 12.12.1988
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: cAMP-независимая протеинкиназа, фосфорилирование РНК-связывающих белков.
Аннотация
Экстракты хрусталиков лягушки Rana tеmроrariа содержат cAMP-независимую протеинкиназу, количественно сорбирующуюся на иммобилизованной РНК при физиологической ионной силе. Максимальные уровни активности наблюдаются в корковых отделах хрусталика, несколько меньшие — в эпителии и минимальные — в ядре линзы. С помощью аффинной хроматографии на поли(U)-сефарозе получены трубоочищенные препараты взаимодействующей с РНК протеинкиназы из эпителия, коры и ядра хрусталика. Показано, что в препаратах отсутствуют активные формы фосфатаз, АТФаз и протеаз, которые могут искажать результаты опытов по фосфорилированию экзогенных и эндогенных субстратов. Содержащаяся в препаратах протеинкиназа катализирует присоединение фосфатных групп к треониновым и сериновым остаткам в молекулах казеина, не фосфорилирует гистоны и использует GTP наряду с ATP в качестве доноров фосфата. Гепарин и РНК в низких концентрациях подавляют активность протеинкиназы. Представленные результаты позволяют идентифицировать взаимодействующую с РНК протеинкиназу (или протеинкиназы) хрусталика как казеиновую киназу типа II. Показано, что инкубация препаратов РНК-связывающих белков эпителия и коры хрусталика с [γ-32P]ATP ведет к включению радиоактивного фосфата в шесть-семь полипептидных цепей с молекулярной массой 27—130 кДа; Присутствие поли(U) или гепарина ингибирует реакцию самофосфорилирования. cAMP не стимулирует реакцию; ионы Ca2+ подавляют самофосфорилирование РНК-связывающих белков.