БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 2, с. 329–337
УДК 577.175.4
Аффинная хроматография тироксинсвязывающих белков сыворотки крови человека
Институт биоорганической химии АН БССР, Минск
Поступила в редакцию 07.08.1988
После доработки 19.10.1988
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: аффинная хроматография, сыворотка крови, тироксинсвязывающие белки, тироксин.
Аннотация
Аффинная матрица, полученная путем присоединения L-тироксина (T4 к активированной эпихлоргидрином сефарозе 4B, биоспецифически адсорбирует из нормальной и ретроплацентарной сыворотки крови человека тироксинсвязывающий глобулин (ТСГ), белки 25К, 80/27К, иммуноглобулин G (IgG) и альбумин (ЧСА). Показано, что качественный и количественный составы адсорбированной белковой смеси зависят от концентрации иммобилизованного T4, pH среды, температуры и продолжительности инкубации аффинного сорбента с сывороткой. Эффективными элюентами (десорбция 85—100% белка) для ТСГ являются 1 мМ NaOH, 3 М NH4SCN, 10−5 М T4 или 3 мМ 8-анилинонафталин-1-сульфокислота (АНС); для 25К и ЧСА — NaOH, NH4SCN, 3 М MgCl2 или 12 мМ холат натрия; для 80/27К и IgG — NaOH, NH4SCN или MgCl2. L-Тироксин десорбирует также 6—8% 80/27К и 25К; холат натрия элюирует ~6% ТСГ. Элюированные и дополнительно очищенные белки 25К, 80/27К и ТСГ по-разному связывают [125I]T4 в интервале pH 2—9 и различаются по устойчивости к термоинактивации в диапазоне 50—80°. С помощью двойной радиальной иммунодиффузии в геле с использованием антисывороток к ТСГ, 25К, 80/27К, ЧСА и IgG показано, что эти белки не имеют общих антигенных детерминант. Сделан вывод, что новые белки 25К и 80/27К не являются фрагментами или агрегатами известных T4-связывающих белков, а представляют собой эндогенные компоненты системы белков крови человека, связывающих тиреоидные гормоны.