БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 1, с. 43–51
УДК 577.152.3
Выделение и характеристика гексозаминидазы A и активирующего белка из почки человека
Институт медицинской генетики АМН СССР, Москва
Поступила в редакцию 12.07.1988
После доработки 09.12.1988
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гексозаминидаза, белок-активатор, GМ2-ганглиозид.
Аннотация
Из почки человека выделена и очищена до электрофоретически гомогенного состояния гексозаминидаза A (ГА). Основные этапы очистки — ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе, гель-фильтрация на тойоперле HW-55 и хроматофокусирование на PBE 94. Выход фермента составил 26,6%, очистка — 1133,6 крат. Исследованы физико-химические и кинетические параметры: молекулярная масса очищенного фермента равна 100000; для 4-метилумбеллиферил-2-ацетамидо-2-дезокси-β-D-глюкопиранозида Km = 0,6 мМ, оптимум pH — в интервале pH 4,4—4,6, pI≃5,0. Исследован аминокислотный состав выделенной ГА. К очищенной ГА получена специфическая антисыворотка, которая не дает иммунопреципитации с экстрактом фибробластов, характеризующимся мутационной блокадой синтеза ГА, Выделение и очистку GM2 осуществляли из мышиной печени и из мозга больной, погибшей от болезни Тея—Сакса, вводя метку путем обработки GM2 тритированным уксусным ангидридом. Удельная радиоактивность [3H]GM2 составила 521 и 2065 Ки/моль соответственно. Метка была введена в остатки N-ацетилнейраминовой кислоты и GalNAc этих препаратов GM2. Из почки человека выделен и частично очищен белок-активатор, солюбилизирующий естественный субстрат ГА. Выход белка-активатора составил 19,9%, очистка — ~480 крат. Молекулярная масса очищенного белка-активатора составила 21000. Очищенный препарат ГА гидролизовал [3H]GM2 только в присутствии белка-активатора. Введение белка-активатора в инкубационную смесь, состоящую из экстракта культуры нормальных фибробластов и [3H]GM2, увеличивало скорость гидролиза субстрата в среднем более чем в 10 раз.