БИОХИМИЯ, 1990, том 55, вып. 1, с. 3–11
УДК 577.152.344
Ферменты заключительного этапа протеолиза главного запасного белка семян гречихи
Межфакультетская ПНИЛ молекулярной биологии и биоорганической химии им. А.Н. Белозерского, МГУ
Поступила в редакцию 06.07.1988
После доработки 09.09.1988
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гречиха, запасной белок, карбоксипептидаза, цистеиновая протеиназа, протеолиз.
Аннотация
Из прорастающих семян гречихи с помощью фракционирования (NH4)2SO4, гель-фильтрации на сефадексе G-150, ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-тойоперле 650 и хроматофокусирования очищены два протеолитических фермента, осуществляющих заключительный этап протеолиза главного запасного белка семян 13S глобулина. Показано, что один из них является цистеиновой протеиназой, а другой — карбоксипептидазой. Эти ферменты очищены соответственно в 74 и 128 раз. Молекулярные массы интактных цистеиновой протеиназы и карбоксипептидазы, определенные гель-фильтрацией на сефадексе G-150, соответственно равны 74000 и 78500 Да. Эти ферменты имеют довольно близкие оптимумы pH активности (5,5 и 5,3 соответственно), но заметно различающиеся pI (4,5 и 5,8). Цистеиновая протеиназа осуществляет гидролиз модифицированного при прорастании 13S глобулина только при постоянном удалении продуктов реакции из инкубационной смеси. В присутствии карбоксипептидазы степень деградации запасного белка заметно возрастает. Предполагается, что эти две протеазы завершают гидролиз 13S глобулина после его предварительного расщепления ранее описанной металлопротеиназой, присутствующей в покоящихся семенах гречихи.