БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 12, с. 2016–2022
УДК 517.152.1
Структурная роль остатков гистидина NAD(P)-глутаматдегидрогеназы печени быка
Институт биохимии им. A.Н. Баха АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 15.04.1985
Аннотация
Фотоокисление NAD(P)-глутаматдегидрогеназы из печени быка в присутствии метиленового синего и низкой интенсивности света протекает в две стадии: активации и инактивации. На стадии активации, продолжительность которой зависит от температуры, интенсивности освещения и концентрации красителя, происходит разрушение двух остатков гистидина. На стадии инактивации, которая описывается кинетикой первого порядка (k = 3,22 · 10−2 мин−1) изменение активности коррелирует с изменением удельной эллиптичности и сопровождается разрушением еще трех остатков гистидина и одного остатка триптофана. Эти данные свидетельствуют о структурной роли остатков гистидина. Изменение свойств глутаматдегидрогеназы при модификации гистидиновых остатков диэтилпирокарбонатом (ДЭП) зависит, от pH и концентрации модифицирующего реагента. Карбэтоксилированию при pH 6,0 и pH 7,5 подвергаются приблизительно четыре остатка гистидина, однако скорость модификации выше при pH 7,5. Инкубация фермента с ДЭП при низких концентрациях независимо от pH сопровождается увеличением активности на 15—20%. В присутствии высоких концентраций ДЭП при pH 7,5 происходит быстрая инактивация глутаматдегидрогеназы. Обработка карбэтоксилированного неактивного фермента гидроксиламином приводит к регенерации остатков гистидина (исчезновение пика при 242 нм) без восстановления активности. Получены данные по триптофановой флуоресценции и по совместному действию ДЭП и пиридоксаль-5′-фосфата на активность фермента, показывающие, что инактивация глутаматдегидрогеназы при высоких концентрациях ДЭП при pH 7,5 связана с модификацией ε‑амииогрупиы лизина‑126.