БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 11, с. 1797–1804
УДК 577.152.277/012.8
Фракционирование и очистка ДНК-метилаз Shigella sonnei 47
Научно-исследовательский институт медицинской энзимологии АМН СССР, Москва
Поступила в редакцию 25.12.1984
Аннотация
Проведено сравнительное изучение возможностей различных видов колоночной хроматографии и изоэлектрофокусирования для анализа набора ДНК-метилаз штамма Shigella sonnei 47. На основе катионообменной хроматографии разработан простой, быстрый и удобный метод получения высокоактивного суммарного препарата ДНК-метилаз. Показано, что аффинная хроматография на гепарин-сефарозе обеспечивает разделение метилаз по признаку специфичности к азотистому основанию. С помощью метода изоэлектрофокусирования (ИЭФ) продемонстрировано присутствие в клетках Shigella sonnei 47 шести индивидуальных ферментов метилирования ДНК, различающихся по значению изоэлектрических точек. Доказана повышенная способность ДНК-метилаз Shigella sonnei 47 к неспецифической агрегации в процессе фракционирования, что делает использование колоночной хроматографии непригодным для выделения и очистки индивидуальных метилирующих ферментов исследуемого штамма. Обсуждаются преимущества метода ИЭФ, а также его возможность в плане изучения различных молекулярных форм сайт-специфических ферментов.