БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 10, с. 1571–1581
УДК 576.311.347 : 577.153.36
Условия взаимного перехода олигомерных форм митохондриальной креатинкиназы сердца
Кафедра биохимии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 02.02.1985
Аннотация
Разработан метод получения очищенной креатинкиназы из митохондрий сердца быка, включающий экстракцию креатинкиназы из митохондрий солевым раствором, концентрирование на геле фосфата целлюлозы и гель-фильтрацию на сефакриле S-300. Методами ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы и гель-фильтрации показано, что митохондриальная креатинкиназа присутствует в растворе в виде смеси двух основных форм — октамера и димера. Изменение ионной силы от 0,02 до 0,25, температуры от 5 до 20°, замораживание-оттаивание, а также природа присутствующих в среде одновалентных анионов (Cl−, NO3−, СН3COO−) и катионов (Na+, K+) не влияют на распределение олигомерных форм. При pH 6,0 основной формой является октамер; увеличение pH вызывает диссоциацию октамера. Равновесная смесь субстратов креатинкиназной реакции в присутствии Mg2+ также вызывает диссоциацию октамера; диссоциация не происходит в отсутствие Mg2+ и в присутствии каждого из субстратов в отдельности. Неработающая пара субстратов — Mg-ADP и креатин — вызывает диссоциацию октамера в присутствии ионов хлора, но не ацетата. Делается вывод, что диссоциирующее действие субстратов обусловлено конформационными изменениями субъединиц, сопровождающими формирование структуры активного центра креатинкиназы в процессе катализа. При физиологических концентрациях нуклеотидных субстратов степень диссоциации октамера зависит от pH, соотношения концентраций креатинфосфата и креатина, от присутствия неорганического фосфата. Предполагается, что указанные факторы могут регулировать обратимый переход октамера в димер in vivo.