БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 9, с. 1499–1503
УДК 577.154.33
Титрование активных центров ферментов: целлобиогидролаза целлюлазного комплекса
Институт биохимии им. A.Н. Баха АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 03.01.1985
Аннотация
Разработан новый подход к титрованию активных центров ферментов, основанный на использовании неспецифического субстрата с низким сродством к ферменту и специфического лиганда (субстрат, ингибитор) с высоким сродством. С помощью данного подхода впервые оттитрован фермент класса карбогидраз: экзоцеллобиогидролаза целлюлазного комплекса Trichoderma reesei и определено ее сродство к полимерному лиганду. В качестве неспецифического субстрата использован п-нитрофенил-β-D-лактозид, в качестве специфических лигандов — целлобиоза и KM-целлюлоза. Установлено, что на молекулу фермента (Mr 46000, по данным титрования) приходится один активный центр. Число оборотов фермента при гидролизе п-нитрофенил-β-D-лактозида составляет 0,07 с−1 (pH 4,5, 20°), Km — 0,5 мМ. Фермент обладает очень высоким сродством к целлобиозе и, особенно, KM-целлюлозе (Ki соответственно 6 и 0,1 мкМ).