БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 9, с. 1463–1470
УДК 577.123
ДНК-зависимая РНК-полимераза из кинетопластов Crithidia oncopelti
Биологический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 13.12.1984
Аннотация
Из кинетопластов Crithidia oncopelti выделена митохондриальная ДНК-зависимая РНК-полимераза и изучены ее свойства. РНК-полимеразу солюбилизировали из структур 2%-ным дигитонином в 0,25 М KCl. Фермент очищен в 550 раз по активности гель-фильтрацией через сефадекс 4B и последующей хроматографией на гепарин-сефарозе 4B, фосфоцеллюлозе и ДЭАЭ-сефадексе A-50. Определены оптимальные условия РНК-полимеразной реакции (время инкубации, температура, концентрации Mg2+, K+ и т.д.). Установлено, что активность фермента не ингибируется α-аманитином, рифампицином и стрептолидигином, но сильно подавляется ионами Mn2+, высокой концентрацией KCl, а также бромистым этидием. Выделенная РНК-полимераза транскрибирует денатурированную ДНК значительно лучше, чем нативную. Фермент заметно активнее использует в качестве субстрата мтДНК (в составе гибридных плазмид), чем ядерную. Среди использованных субстратов наибольшую матричную активность пишет однонитевая поли(dAT). По всем изученным свойствам ДНК-зависимая РНК полимераза из кинетопластов C. oncopelti сходна с митохондриальными ферментами других эукариот, но отличается от ядерных ферментов этого организма и от бактериальных РНК-полимераз.