БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 7, с. 1108–1119
УДК 577.154
Получение высокоочищенных, различающихся по адсорбционной способности множественных форм эндо-1,4-β-глюканаз Trichoderma viride методами аффинной хроматографии на целлюлозе и высокоэффективного хроматофокусирования
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Институт биохимии им. А.Н. Баха АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 19.10.1984
Аннотация
Из культуральной жидкости гриба Trichoderma viride выделены и очищены шесть множественных форм эндоглюканаз, гомогенных по данным электрофореза в полиакриламидном геле, изоэлектрофокусирований и хроматофокусирования в полибуфере. Стадии очистки включали фракционное осаждение сульфатом аммония, аффинную хроматографию на целлюлозе в градиенте pH и ионной силы, повторную аффинную хроматографию в градиенте ионной силы, ионообменную хроматографию на ДЭАЭ сфероне и высокоэффективное хроматофокусирование. Эндоглюканазы I и II имеют изоэлектрическую точку 4,2, молекулярную массу 36000 и 45000 Да соответственно и слабо адсорбируются на высококристаллической целлюлозе (в 30—50 раз менее эффективно, чем эндоглюканазы V и VI). Эндоглюканазы III—VI имеют изоэлектрическую точку 4,65, молекулярную массу 53000 и различаются по эффективности адсорбции в 3—4 раза. Каждая из эндоглюканаз была однородной по адсорбционной способности на целлюлозе. Все эндоглюканазы I—VI проявляют идентичные кинетические закономерности при гидролизе КМ-целлюлозы и образуют глюкозу в качестве продукта уже на ранних стадиях гидролиза (с небольшим лаг-периодом). Они гидролизуют с близкими скоростями (но в несколько десятков раз медленнее, чем КМ-целлюлозу) глюкоманнан, КМ-глюкоманнан, ксилан и КМ-ксилан, но не гидролизуют амилозу, ламинарии, маннам и галактоманнан.