БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 7, с. 1095–1104
УДК 577.155.2
Выделение и свойства кислой сайт-специфичной эндонуклеазы из зрелых яйцеклеток морского ежа Strongylocentrotus intermedius
Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВНЦ АН СССР, Владивосток
Поступила в редакцию 03.09.1984
Аннотация
В зрелых яйцеклетках морского ежа и клетках эмбрионов на ранних стадиях дифференицировки обнаружена кислая сайт-специфичная эндонуклеаза. Фракционированием сульфатом аммония с последующей хроматографией на колонках с ДЭАЭ, фосфоцеллюлозой и оксиапатитом достигнута очистка в 18000 раз. Молекулярный вес фермента определен ~29000, оптимум pH — 5,5. Активность фермента не зависит от ионов двухвалентных металлов, ЭДТА, ATP и тРНК, но в значительной степени модулируется NaCl. Максимальная скорость расщепления суперкольцевой (1 форма) ДНК наблюдается при 100 мМ NaCl. Увеличение концентрации NaCl до 350 мМ незначительно снижает скорость расщепления I формы с образованием II формы, но полностью подавляет накопление III формы. Рестрикционный анализ продуктов ферментного гидролиза ДНК Col El и pBR322 показал, что на ранних этапах гидролиза фермент проявляет выраженную специфичность к определенным сайтам, количество которых составляет для ДНК Col El — 12 и pBR322 — 8 сайтов.