БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 7, с. 1067–1075
УДК 577.152.315
Фосфопротеинфосфатаза клеточных ядер селезенки быка: физико-химические свойства
Биолого-почвенный факультет Ленинградского государственного университета им. А.А. Жданова
Поступила в редакцию 15.06.1984
Аннотация
Изучены физико-химические свойства фосфопротеинфосфатазы (КФ 1.3.1.16) клеточных ядер, селезенки быка, Фермент обладает широкой субстратной специфичностью, катализирует дефосфорилирование фосфоказеина, ATP, ADP, п-нитрофенилфосфата (пНФФ). Km для ATP, ADP, пНФФ соответственно равны 0,44, 0,43, 1,25 мМ. Mr фермента, по данным гель-фильтрации на сефадексе G-75 и электрофореза в полиакриламидном геле различной концентрации, составляет ~33000. При электрофорезе в присутствии DS-Na выявляются две белковые полосы с Mr 12000 и 18000. В молекуле фермента преобладают остатки кислых аминокислот, выявлены две свободные SH-группы и два дисульфидных мостика. Фосфопротеинфосфатаза — гликопротеин, содержащий ~22% углеводов. Белок обладает дополнительным максимумом поглощения при 560 нм. Молибдат аммония является конкурентным ингибитором с Ki 0,37 мкМ, а фторид натрия — неконкурентным ингибитором с Ki 1,3 мМ. Инкубирование в присутствии 2 мМ фенилметилсульфонилфторида в течение 25 ч приводит к потере ~46% ферментативной активности. Молибдат аммония, фторид натрия и ФМСФ являются обратимыми ингибиторами. Модификация SH-групп, NH2-групп и гистидина приводит к снижению ферментативной активности. Инкубация фосфопротеинфосфатазы с [γ33P] ATP приводит к включению 0,33 моль 33Р на 1 моль фермента. Обсуждается механизм гидролиза фосфоэфирной связи, катализируемого ферментом.