БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 6, с. 919–927
УДК 577.150.36
Выделение и молекулярно-кинетические свойства рибулозодифосфат-карбоксилазы из клеток водородной бактерии Pseudomonas thermophila
Институт почвоведения и фотосинтеза АН СССР, Пущино Московской обл.
Институт микробиологии АН СССР, Москва
Поступила в редакцию 08.06.1984
Аннотация
Частично очищенный препарат рибулозодифосфат-карбоксилазы (РДФ-карбоксилаза, КФ 4.1.1.39) выделяли из клеток Ps. thermophila, разрушенных ультразвуком, центрифугированием при 140000 g, осаждением белка надосадочной жидкости с помощью (NH4)2SO4 60%-ного насыщения и гель-фильтрацией через сефадекс G-200 или сефарозу 2B. Соотношение молекулярных форм, обнаруживаемых при элюировании активного белка, зависит от условий гель-фильтрации: при температуре 4° в присутствии ионов Mg2+ преобладают высокомолекулярные формы, тогда как при 40° в присутствии кроме ионов Mg2+ также и дитиотреитола (ДТТ) и NaHCO3, увеличивается относительная доля низкомолекулярных форм. Показана взаимопревращаемость олигомеров при рехроматографии в разных условиях. Дальнейшую очистку препарата проводили на ДЭАЭ-целлюлозе (в отсутствие ДТТ и NaHCO3) при 4°. Молекулярная масса полученного электрофоретически гомогенного препарата равна 520000 Да. После прогревания в присутствии всех добавок эта форма исчезает и появляются низкомолекулярные
олигомеры. Изучены некоторые свойства РДФ-карбоксилазы Ps. thermophila. Температурный и pH-оптимумы активности равны 50° и pH 7,2. Фермент стабилен после прогревания при 60° в течение 15 мин. Km для РДФ равна 0,1 мМ в оптимальных условиях. Зависимость скорости реакции от концентрации NaHCO3 сигмоидальная, константа s0,5 для бикарбоната равна 0,89 мМ. Обсуждается сущность термотропных конформационных переходов РДФ-карбоксилазы Ps. thermophila.