БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 5, с. 795–803
УДК 577.152.344.1:591.146
Очистка и свойства катепсина D молочных желез лактирующих крольчих
Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина АН СССР, Москва
Институт биохимии и физиологии им. Н.И. Захарьева АН КиргССР, Фрунзе
Поступила в редакцию 08.08.1984
Аннотация
Катепсин D из молочной железы лактирующих крольчих был очищен путем фракционирования гомогената сульфатом аммония, осаждения примеси при кислых pH, двухкратной аффинной хроматографии на пепстатин-сефарозе 4B и гель-фильтрации на сефадексе G-100 в 360 раз с выходом 16%. После изоэлектрического фокусирования обнаружены четыре множественные формы с pI 5,8; 6,3; 6,5 и 7,2. Очищенный фермент был гомогенным при электрофорезе в полиакриламидном геле (ПААГ), при гель-фильтрации на сефадексе G-100 и имел единственную N-концевую аминокислоту — глицин. При гель-фильтрации и электрофорезе в ПААГ в присутствии DS-Na препарат давал одну белковую полосу с молекулярной массой 45 кДа. Катепсин D содержит 6,4% углеводов, состоящих из маннозы, галактозы, фукозы и глюкозамина. Аминокислотный состав фермента характерен для катепсинов D из других тканей. Очищенная протеиназа гидролизует бычий гемоглобин с оптимумом pH 3,0 и Km 1 · 10−5 M, гексапептид L-Leu-L-Ser-L-Phe(NO2)-L-Nle-L-Ala-L-Leu-OMe по связи Phe(NO2)-Nle с Km 4 · 10−5 M и kкат 0,9 с−1. B-цепь окисленного инсулина расщепляется ферментом преимущественно по связям Leu15-Tyr16, Phe24-Phe25 и Phe25-Tyr26. Фермент ингибируется пепстатином с Ki 2,5 · 10−9 M и N-диазоацетил-N′-(2,4-динитрофенил)этилендиамином.