БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 5, с. 733–743
УДК 577.152.2
Выделение, очистка и реконструкция гидрофобного сектора (CF0) ATP-синтетазного комплекса хлоропластов
Кафедра биохимии Университета дружбы народов им. П. Лумумбы, Москва
Секция биохимии, молекулярной и клеточной биологии Корнельского университета, Итака, США
Поступила в редакцию 14.03.1984
Аннотация
Из хлоропластов салата, обработанных бромидом натрия, с использованием октилглюкозида и холата солюбизирован мембранный сектор (CF0) ATP-синтетазного комплекса. Наиболее активная фракция осаждается при 10—45% насыщения сульфатом аммония и практически лишена компонентов ATPазы (CF1). Включение CF0 в протеолипосомы, содержащие бактериородопсин, и последующая обработка протеолипосом изолированным из хлоропластов шпината сопрягающим фактором CF1 сопровождается реконструкцией системы светозависимого синтеза ATP. Скорость синтеза ATP увеличивается более, чем в 12 раз после предварительной обработки CF0 лизолецитином. Наиболее эффективным при дальнейшей очистке оказался 10—30%-ный градиент сахарозы с 0,4%-ным холатом, а также иммобилизованная поли(L-лизин)-дезоксихолевая кислота в качестве матрикса для гидрофобной хроматографии. CF0, очищенный методом гидрофобной хроматографии, при электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии DS-Na и мочевины распадается на три субъединицы с молекулярной массой 20, 17 и 8 кДа. Последняя из них соответствует по электрофоретической подвижности ДЦКД-связывающему протеолипиду из хлоропластов шпината, обработанных [14C]ДЦКД. Показано, что трех субъединиц в составе комплекса достаточно для реконструкции системы светозависимого синтеза ATP. Образование ATP в реконструированной системе зависит от количества CF0 и CF1 и ингибируется ДЦКД и разобщителями фотофосфорилирования. Сделано заключение, что в состав нативного мембранного сектора ATP синтетазного комплекса хлоропластов кроме ДЦКД-связывающего протеолипида дополнительно входит еще одна из идентифицированных субъединиц с молекулярной массой 20 и 17 кДа или обе эти субъединицы.