Получение и свойства апоформы «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis

Аннотация

Показано, что гексамерная молекула (M_r-300000) «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей S. carlsbergensis содержит три молекулы пиридоксаль-5′-фосфата, т.е. один активный центр в димере фермента. Описаны получение и некоторые свойства апоформы «биосинтетической» L-треониндегидратазы. Реконструкция холоформы сопровождается появлением лаг-периода на кривых накопления продукта реакции во времени. Независимость скорости восстановления ферментативной активности от концентрации апоформы и уменьшение величины лаг-периода при увеличении концентрации пиридоксаль-5′-фосфата указывает на то, что при реконструкции холофермента лимитирующей является стадия, связанная с конформационной перестройкой активного центра фермента. Скорость восстановления ферментативной активности уменьшается при щелочных значениях pH (pH ≥8,0). Определены величины K_m для пиридоксаль-5′-фосфата в области pH 6,5—9,0. Обработка апоформы фермента высокими концентрациями β-меркаптоэтанола (0,75—1 M) приводит к неспособности фермента реактивироваться в присутствии пиридоксаль-5′-фосфата, что связано, вероятно, с восстановлением дисульфидных мостиков димера апофермента. Апоформа L-треониндегидратазы более, ч холоформа фермента, склонна к олигомеризации с образованием каталитически неактивных агрегатов. Пиридоксаль-5′-фосфат в меньшей степени, чем аллостерические эффекторы (L-валин и L-изолейцин) и субстрат (L-треонин), влияет н состояние равновесия между олигомерными формами фермента.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: