БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 4, с. 562–567
УДК 577.088
Выделение N,N′-дициклогексилкарбодиимидсвязывающего протеолипида ATP-синтетазного комплекса хлоропластов методом гидрофобной хроматографии
Кафедра биохимии Университета дружбы народов им. П. Лумумбы, Москва;
Секция биохимии, молекулярной и клеточной биологии Корнельского университета, Итака, США
Поступила в редакцию 16.03.1984
Аннотация
Из хлоропластов шпината методом гидрофобной хроматографии выделен и очищен N,N′-дициклогексилкарбрдиимид (ДЦКД)-связывающий протеолипид. Для этого очищенный ДЦКД-чувствительный АТРазный комплекс адсорбировали на иммобилизованной поли(L-лизин)-дезоксихолевой кислоте и последовательно обрабатывали раствором мочевины и дезоксихолата. Показано, что в присутствии 7 M мочевины достигается практически полное отделение от комплекса субъединиц сопрягающего фактора CF1, в то время как часть белка остается связанной с гидрофобным матриксом. Добавление в элюирующий буфер 6 мМ дезоксихолата приводит к элюции примерно половины связавшегося с матриксом белка. Полученная фракция почти целиком состоит из ДЦКД-связывающего протеолипида, что было подтверждено методом электрофореза в полиакриламидном геле с DS-Na и радиоавтографией аналогичного препарата, полученного из обработанных [14C]ДЦКД хлоропластов. Молекулярная масса очищенного протеолипида равна ~8 кДа. Включение полученного препарата в мембраны протеолипосом и последующая их обработка CF1 не приводит к реконструкции активного ATP-синтетазного комплекса. Сделано предположение, что для реконструкции мембранного сектора ATP-синтетазы необходимо наличие дополнительных, кроме протеолипида, белковых субъединиц.