БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 3, с. 495–502
УДК 577.152.5
Определение сайта узнавания аденинспецифической метилазы Shigella sonnei 47 с помощью гидразинолиза ДНК и последующего разделения пуриновых олигонуклеотидов тонкослойной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе
Научно-исследовательский институт медицинской энзимологии АМН СССР, Москва
Лаборатория молекулярной биологии и биоорганической химии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва
Поступила в редакцию 23.07.1984
Аннотация
Разработан метод разделения олигопуриновых блоков по длине и составу с помощью двумерной тонкослойной хроматографии на пластинах с ДЭАЭ-целлюлозой, позволяющий проводить сравнительный анализ содержания различных пуриновых изоплит в ДНК разного происхождения. В случае анализа метилированной ДНК метод позволяет сравнивать субстратную специфичность различных ферментов метилирования адениновых остатков в ДНК. В сочетании с ферментативной обработкой меченых метилированных изоплит метод позволяет расшифровывать метилируемую последовательность, а в ряде случаев конструировать сайт узнавания аденинспецифической метилазы в целом. С помощью предложенного метода было установлено, что метилаза Ssol узнает последовательность 5′…G-A*-A-T-T-…3′ и метилирует в ней ближайший к 5′-концу адениновый остаток.