БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 3, с. 384–393
УДК 577.152.1
Функциональная роль — SH-групп «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis
Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений, Купавна Московской обл.
Поступила в редакцию 23.04.1984
Аннотация
Изучено число, реакционная способность и функциональная роль SH-групп «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей S. carlsbergensis. Титрованием SH-групп ДТНБ (5,5′-дитиобис(2-нитробензойная кислота) в нативном гексамерном ферменте (мол. масса 300000 Да) обнаружено 18 SH-групп, которые по своей реакционной способности подразделяются на три категории по шесть SH-групп в каждой. Наиболее медленно титруемые SH-группы 3-й категории участвуют в процессе олигомеризации гексамерного фермента с образованием каталитически неактивных высокоагрегированных форм, поскольку число и константа скорости модификации таких SН-групп зависят от концентрации ферментного белка. Высокие концентрации аллостерических эффекторов (L-валина или L-изолейцина), препятствующие такой олигомеризации, уменьшают число и скорость модификации этих SH-групп, очевидно, в связи с вызванными ими информационными перестройками молекулы фермента, что приводит к экранированию SH-групп, локализованных в областях ассоциации олигомера. Шесть SH-групп 2-й категории, титруемых со средней скоростью, играют существенную роль в ферментативной активности L-треониндегидратазы, возможно, стабилизируя нативную конформацию активных центров. Из шести быстро титруемых SH-грунп 1-й категории четыре SH-групиы участвуют в аллостерическом функционировании двух содержащихся в гексамере «активаторных» аллостерических центров, а две оставшиеся SH-группы также влияют на каталитическую активность. Анализ результатов титрования SH-групп 1-й категории в присутствии высоких или низких концентраций L-изолейцина подтвердил предположение об «исключающем» связывании этого эффектора на «активаторных» и «ингибиторных» аллостерических центрах L-треониндегидратазы. Показано, что 12 SH-групп в нативном ферменте недоступны действию ДТНБ и титруются только после денатурации фермента в 6 M гуанидинхлориде, причем шесть из них титруются только после восстановления NaBH4, указывая на наличие в гексамере трех S—S-мостиков, связывающих субъединицы (мономеры) фермента в димеры, содержащие лишь один активный центр.