БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 3, с. 355–362
УДК 577.152.577.166
Протеиназа I из Аcremonium chrysogenum — сериновая протеиназа нового типа
Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков, Москва
Химический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 28.06.1984
Аннотация
Из фильтрата культуральной жидкости гриба Acretnonium chrysogenum, продуцента антибиотика цефалоспорина C, осаждением изопропанолом и аффинной хроматографией на бацитрацин-сефарозе выделена сериновая протеиназа I. В результате была достигнута 217-кратная очистка и получен чистый фермент с выходом 52%, Молекулярный вес фермента равен 28000, аминокислотный состав: 1/2 Cys4-5, Меt2-3, Asx34, Thr23, Ser29, Glx15, Pro12, Gly38, Ala34, Val18, Ile14, Leu18, Tyr11, Phe8, His6, Lys10, Arg11, Trp5. Фермент имеет изоэлектрическуго точку >10,0. Оптимум протеолитического действия по азоказеину — при pH 11,0—11,5, а по расщеплению специфического субстрата сериновых протеиназ Z-Ala-Ala-Leu-pNA — при pH 10,0. Фермент наиболее стабилен в интервале pH 4—10. Температурный оптимум 55°. Протеиназа I из Acremonium chrysogenum полностью ингибируется специфическими ингибиторами сериновых протеиназ фенилметилсульфонилфторидом и диизопропилфторфосфатом, овомукоидом, а также п-хлормеркурибензоатом и ацетатом ртути. Фермент имеет необычную для типичных субтилизинов N-концевую последовательность аминокислот: Ala-Leu-Val-Thr-Gln-Asn-Gly-Ala-Pro-Trp-Gly-Leu-Gly-Thr-Ile-Xaa-Gln-Asn-Gln-Pro-Gly-(Ala)-Thr-Ser-Tyr-Ile-Tyr-Xaa-Gly.