БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 2, с. 279–288
УДК 577.123
Локализация места синтеза и содержание мРНК кининогена быка
Институт общей генетики АН СССР им. Н.И. Вавилова, Москва
Поступила в редакцию 05.06.1984
Аннотация
Химически синтезированный и клонированный в составе плазмиды pBR322 ген брадикинина (БК) использовали для определения места синтеза и содержания мРНК, кодирующей белковый предшественник БК — кининоген. С помощью «дот»-гибридизации поли(A+)-РНК печени, почек, селезенки, поджелудочной и молочной желез с [32P]ДНК гена БК или плазмиды pKB4 показано, что эффективная гибридизация имеет место только в случае мРНК печени. Следовательно, основным местом синтеза мРНК кининогена является печень, а в других изученных органах синтез вообще отсутствует или его уровень на два порядка ниже, чем в печени. Несколькими независимыми методами определено, что содержание мРНК кининогена составляет в среднем 0,6% от всей клеточной поли(A+)-РНК печени. Выделенные методом аффинной хроматографии на целлюлозе с иммобилизованной на ней ДНК гема БК или плазмиды pKB4 препараты поли(A+)-РНК, обогащенные мРНК кининогена, охарактеризованы на степень гомогенности гибридизацией с кДНК и использованы для трансляции в бесклеточной белоксинтезирующей системе из ретикулоцитов кролика. Показано, что продукты трансляции этой мРНК содержат биологически активный БК, тестируемый по сокращению гладкой мускулатуры изолированного рога матки крысы.