Реконструкция и изучение мультиферментной системы 11β-гидроксилирования стероидов

Аннотация

Реконструкция мультиферментной 11β-гидроксилазной системы осуществлена на основе гомогенных белков, выделенных из митохондрий надпочечников быка: цитохрома P-450 (P-450) (11β), удельное содержание гема 19—20,5 нмоль на 1 мг белка), адренодоксина (Ад) и адренодоксин-редуктазы (АР). Вследствие высокой гидрофобности P-450(11β) обязательным компонентом реконструированной системы является неионный детергент. Низкие концентрации твина 20 (до 0,015% или 115 мкМ) стимулируют реакцию гидроксилирования 11β -дезоксикортикостерона за счет увеличения растворимости гемопротеина. Дальнейшее увеличение концентрации детергента приводит к ингибированию реакции в результате инактивации цитохрома и нарушения его взаимодействия с Ад. Электронтранспортная активность АР и диферментного комплекса АР—Ад не изменяется в диапазоне концентраций твина 20 0—0,4%. В растворе с оптимальной концентрацией твина 20 (0,010—0,015%) определены концентрации АР и Ад, обеспечивающие полумаксимальную активность мультиферментной системы, составляющие 9 нМ для АР и 280 нМ для Ад. Показано, что в реконструированной 11β-гидроксилазной системе 75% восстановительных эквивалентов потребляется на образование кислородных радикалов и лишь 25% — на гидроксилирование субстрата. В свою очередь, 74% всех радикальных частиц образуется в активном центре гемопротеина и 25% — в Fe₂S₂-центре Ад. Процесс радикалообразования преобладает над 11β-гидроксилированием в реконструированной мультиферментной системе в широком диапазоне соотношений Ад/P-450(11β) — от 1,0 до 100. Субстрат гидроксилирования в 4 раза увеличивает скорость электронного транспорта в системе за счет стимуляции ферментативного восстановления P-450(11β), но лишь 35% дополнительных восстановительных эквивалентов расходуется на 11β-гидроксилирование, в то время как 65% потребляется на образование кислородных радикалов.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: