БИОХИМИЯ, 1985, том 50, вып. 1, с. 53–62
УДК 577.15.025
Использование спин-меченых аналогов субстратов для сравнительного изучения микросомальных цитохромов P-450 и P-448
Институт химической кинетики и горения СО АН СССР, Новосибирск
Институт органической химии СО АН СССР, Новосибирск
Институт клинической и экспериментальной медицины СО АН СССР, Новосибирск
Поступила в редакцию 05.03.1984
Аннотация
Для сравнительного изучения структуры активного центра микросомальных цитохромов P-450 и P-448 использованы предложенные ранее иод-содержащие алкилирующие стабильные нитроксильные радикалы с различным расстоянием от N—O-группы до атома иода. Эти радикалы вызывают изменения оптических спектров иона Fe3+, находящегося в активном центре фермента, аналогичные субстратам цитохрома P-450. Обнаружены различия в типах связывания этих радикалов с контрольными, фенобарбиталовыми и 3-метилхолантреновыми микросомами. Алкилирующие радикальные аналоги субстратов ковалентно связываются с микросомальным цитохромом P-450 в районе активного центра, что приводит к торможению окисления субстратов типа I и II (анилина и нафталина). Наблюдалось увеличение спектральной константы связывания (Ks) нафталина в присутствии радикала, ковалентно связанного с активным центром цитохрома P-450. Методом ЭПР обнаружено взаимодействие между ионом Fe3+ и радикалом, находящимся в активном центре цитохрома P-450. Из кривых насыщения спектров ЭПР радикалов при 77 K определен вклад иона Fe3+ во время релаксации (T1) радикалов, ковалентно связанных с цитохромом P-450, и оценены расстояния от N—O-группы этих радикалов до иона Fe3+ в активном центре фермента для 3 типов микросом. Из совокупности полученных данных сделаны выводы об особенностях строения активного центра цитохрома P-450 в разных типах микросом.