БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 9, с. 1556–1560
УДК 577.152.4
Использование флуоресцентно меченного цереброзида в качестве субстрата для галактозилцерамидазы фибробластов кожи человека
Институт биологической и медицинской химии АМН СССР, Москва
Поступила в редакцию 01.02.1984
Аннотация
Исследовали возможность применения флуоресцентно меченного цереброзида — 1-0-(β-D-галактозил)-2-N-[6-(2-антроил)гексаноил]-4-сфингенина (Gal-A-сфингенин) — в качестве субстрата для галактозилцерамидазы (ГЦ) из фибробластов кожи человека. С помощью тонкослойной хроматографии и флуориметрии показано ферментативное расщепление Gal-A-сфингенина, степень которого была пропорциональна количеству фермента и времени инкубации. Получены некоторые кинетические параметры ГЦ при использовании Gal-A-сфингенина и качестве субстрата. Показано, что величина удельной активности ГЦ (1,6 нмоль/мг белка за 1 ч) и Km (0,025 мМ), полученные для Gal-A-сфингенина сходны по значению с этими же величинами при применении галактоцереброзида в качестве природного субстрата. В экспериментах с использованием в качестве субстратов для ГЦ смесей Gal-A-сфингенина и галактоцереброзида в разных молярных соотношениях показано, что фермент расщепляет каждый из субстратов с одинаковой скоростью. На основании опытов с ферментными препаратами, полученными из клеток здоровых людей и из фибробластов больного GM1-ганглиозидозом (недостаточность GM1-β-D-галактозидазы) предполагается, что Gal-A-сфингенин является специфическим субстратом для ГЦ.