БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 9, с. 1486–1491
УДК 577.152:547.66
Очистка и характеристика L-α-аминокапролактамгидролазы из клеток Cryptococcus laurentii
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 30.12.1983
Аннотация
Проведены выделение и очистка L-α-аминокапролактамгидролазы из клеток Cryptococcus laurentii. В бесклеточном экстракте обнаружено присутствие L-α-аминокапролактамгидролазной и L-лизинамидазной активностей, поэтому в процессе очистки следили за изменением обеих активностей. Схема очистки состояла из следующих этапов: разрушение клеток с помощью растирания с карборундом; ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе; гель-хроматография на тойоперл HW-55 и ионообменная хроматография на ДЭАЭ-тойоперл. В результате очистки получен гомогенный препарат фермента, обладающий обеими активностями. Определены физико-химические характеристики L-α-аминокапролактамгидролазы. Молекулярная масса по данным гель-хроматографии на сефадексе G-150 составила 250000 Да. Молекулярная масса субъединицы по данным диск-электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии 1% DS-Na равна 63000 Да. Изоэлектрическая точка фермента находится в кислой области при pH 5,5. Коэффициент седиментации составляет 8.9S. Фермент не является гликопротеином. o-Фенантролин в концентрации выше 5 мМ полностью подавляет активность фермента, которая может быть частично восстановлена добавлением избытка хлорида магния, марганца или цинка.