Разделение полипептидов, содержащих хлорофиллы a и b, в светособирающем пигмент-белковом комплексе хлоропластов

Аннотация

Как известно, хлоропласты высших растений содержат три пигмент-белковых комплекса: фотоактивные комплексы фотосистем I и II и не несущий реакционных центров хлорофилл a/b-содержащий комплекс (LHC)^*. По содержанию белка и пигментов LHC является основным комплексом хлоропластов: в него входит 25% белка хлоропластных мембран и 60% суммарного хлорофилла, в том числе весь хлорофилл b (см. обзоры [1, 2]). Полипептидный состав и распределение пигментов по полипептидам являются важнейшими характеристиками надмолекулярной организации пигмент-белковых комплексов. Считалось [1, 2], что LHC содержит только один белок с молекулярной массой 24—29 кДа. У зеленых водорослей, также обладающих LHC, комплекс состоит из двух главных полипептидов с молекулярной массой 21—25 кДа [3]. Было сделано предположение [4], что у высших растений комплекс также содержит два полипептида. Эти полипептиды наиболее ясно выявляются в LHC высших растений методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) при предварительной обработке комплекса денатурирующими агентами, β-меркаптоэтанолом и 8 М мочевиной [5, 6]. В более мягких условиях электрофореза, сохраняющих связь белок—хлорофилл, не удается разделить полипептиды LHC. В денатурирующих условиях, ведущих к разделению полипептидов, хлорофилл, будучи нековалентно связан с протеином, отделяется от белка, перемещаясь в ПААГ в зону так называемого свободного пигмента. В связи с этим распределение хлорофиллов a и b по полипептидам и молярное соотношение полипептидов в LHC остаются неизвестными. Можно лишь предположить, что оба полипептида LHC являются окрашенными, то есть связанными с пигментами [5]. Поэтому целью нашей работы явилось выяснение этих вопросов. При этом необходим был подбор условий, позволяющих разделить полипептиды и сохранить их связь с хлорофиллом. Это удалось осуществить использованием изофокусирования LHC на колонке сахарозы, содержащей 8 М мочевину.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: