БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 8, с. 1367–1374
УДК 577.152.2
Изучение кинетического механизма фосфотрансферазной реакции, катализируемой cAMP-зависимыми протеинкиназами типа I и типа II из скелетных мышц кролика
Проблемная лаборатория химии ферментов биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва
Поступила в редакцию 13.01.1984
Аннотация
Каталитические субъединицы cAMP-зависимых протеинкиназ типов I и II из скелетных мышц кролика были выделены в гомогенном состоянии. Удельные фосфотрансферазные активности гомогенных препаратов каталитических субъединиц составляли 8 мкмоль/мг в 1 мин (тип I) и 6 мкмоль/мг в 1 мин (тип II). Для изучения механизма фосфотрансферазной реакции был применен метод стационарной кинетики и проведен ингибиторный анализ с использованием продуктов фосфотрансферазной реакции: ADP и фосфогистона H1. Показано, что фосфорилирование гистона H1, катализируемое как протеинкиназой типа I, так и типа II, протекает по неупорядоченному «би-би»-механизму. Константы, входящие в кинетическое уравнение фосфотрансферазной реакции, совпадают в своих значениях для каталитических субъединиц протеинкиназ обоих типов и равны KmATP = 11 мкМ, KmH1 = 60 мкМ, KsATP = 5,0 мкМ, KsATP = 27 мкМ. Константа конкурентного ингибирования для Mg-ADP (KiADP) также имеет одинаковые значения для каталитических субъединиц типов I и II и равна 30 мкМ. Фосфорилированный гистон H1 ингибировал фосфотрансферазную реакцию частично конкурентно по отношению к гистону H1 как в случае протеинкиназы типа I, так и в случае протеинкиназы типа II.