БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 7, с. 1178–1183
УДК 577.152.3
Выделение, очистка и некоторые свойства тиаминазы I из Anodonta cygnea
Отдел регуляции обмена веществ АН БССР, Гродно
Поступила в редакцию 16.11.1983
Аннотация
Описано выделение и изучены свойства тиаминазы I из внутренних органов двустворчатых моллюсков. Для получения фермента использовали экстрагирование 0,14 М NaCl, обработку 0,1 М ацетатным буфером, pH 5,0, фракционирование сульфатом аммония и хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. Достигнута очистка в 78 раз с 50%-ным выходом и удельной активностью 0,133 МЕ/мг белка. 0,14 М NaCl стабилизирует фермент, предохраняя его от инактивации в течение 2 недель. Методом стационарной кинетики и изотопного равновесия изучен кинетический механизм тиаминазной реакции и определена Km тиамина (120 мкМ) и 2 значения Km никотинамида: при низкой концентрации тиамина — 95 мМ, при высокой — 10 мМ. Молекулярная активность фермента при наличии косубстрата или в его отсутствие в реакционной среде, соответственно равны: 44 и 0,24 мин−1. Отмечено наличие «всплеска» скорости образования тиазола на первом этапе каталитического процесса в количестве, стехиометрическом концентрации фермента. Константы равновесия тиаминазной реакции с анилином и никотинамидом в качестве косубстратов равны 0,030 и 0,022 соответственно; стандартная свободная энергия процесса в направлении деградации тиамина ~9 кДж/моль.