Кинетическое исследование «активаторного» аллостерического центра «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis

Аннотация

Показано, что активация высокоочищенной биосинтетической L-треониндегидратазы из пивных дрожжей S. carlsbergensis рядом аминокислот обусловлена связыванием их в «активаторном» аллостерическом центре, не перекрывающемся с активным центром. Высокие концентрации L-изолейцина, ретроингибирующие фермент, связываются в самостоятельном «ингибиторном» центре, не перекрывающемся с активаторным центром. Двойственная регуляторная роль L-изолейцина обусловлена тем, что сродство к нему активаторного центра на порядок выше, чем сродство ингибиторного центра. Для активирующего фермент действия α-аминокислот необходимо наличие в них свободной α-NH₂-группы, важное значение имеет строение углеводородного радикала C₄—C₆, разветвление цепи которого у β-C-атома существенно для максимальной активации. На основе анализа значений pK₁ 8,0 и pK₂ 8,3 групп фермента, участвующих в процессе активации, и значения теплоты ионизации (~1 ккал/моль) группы, имеющей pK₁ 8,0, предполагается, что функциональными группами, существенными для активации фермента, являются SH-группы. Важная роль этих групп для активации фермента и аллостерическая природа фермента доказаны получением его в форме, десенсибилизированной к активирующему действию L-валина, низких концентраций L-изолейцина и ряду других L-α-аминокислот, путем обработки фермента низкими концентрациями HgCl₂ (2 · 10^-5 М) или хранением разбавленных растворов фермента в нестабилизирующих условиях. Десенсибилизированный фермент полностью ресенсибилизируется при добавлении высоких концентраций дитиотреитола (1 · 10^-3 М). Кинетические и регуляторные характеристики ресенсибилизированного и нативного фермента идентичны (при использовании в качестве субстрата как L-треонина, так и L-серина).

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: