БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 4, с. 692–702
УДК 577.152.1
Биферментная система NADH : FMN-оксидоредуктаза-люцифераза из светящихся бактерий
Институт биофизики СО АН СССР, Красноярск
Институт физики им. Л.В. Киренского СО АН СССР, Красноярск
Поступила в редакцию 17.08.1983
Аннотация
Изучена биферментная система NADH : FMN-оксидоредуктаза-люцифераза из светящихся бактерий Beneckea harveyi и Photobacterium leiognathi. Ферменты высокой удельной активности получены путем гель-фильтрации через биогель P-100 и хроматографии на гидроксилапатите. Определены основные кинетические характеристики ферментных препаратов, pH и температурная зависимости активности биферментной системы. На основании экспериментальных данных построена математическая модель функционирования такой системы. В модели учитывается неферментативное окисление FMNH2 кислородом, ингибирование люциферазы FMN и присутствие в системе долгоживущего интермедиата люциферазы. Для частных случаев определены аналитические выражения зависимости интенсивности биолюминесценции биферментной системы люцифераза — редуктаза от времени, концентрации ферментов и их субстратов. Показано, что сопряжение между редуктазой и люциферазой осуществляется благодаря свободному промежуточному продукту FMNH2. Полученные ферментные препараты были использованы для определения микроколичеств NADH с чувствительностью 10-15 моль.