БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 3, с. 511–528
УДК 577.152.1
Константы диссоциации комплексов сукцинатдегидрогеназы с сукцинатом, фумаратом и малонатом
Кафедра биохимии биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 25.07.1983
Аннотация
Торможение окисленной (Eox) и восстановленной (с помощью NAD·H через убихинон) (Ered) мембраносвязанной сукцинатдегидрогеназы N-этил-малеимидом подчиняется кинетике реакции псевдопервого порядка, и константа скорости торможения не зависит от редокс-состояния фермента. Защита фермента от необратимого торможения N-этилмалеимидом использована для определения констант диссоциации комплексов Ered и Eox с сукцинатом, фумаратом и малонатом в условиях, когда внутримолекулярные редокс-превращения фермент-лигандных комплексов невозможны. Показано, что мембраносвязанная сукцинатдегидрогеназа в присутствии теноилтрифторацетона катализирует сукцинат: феназинметосульфат-редуктазную реакцию по механизму, предложенному Слейтером и Боннером. Сравнение констант, измеренных по защите фермента от алкилирования с величинами, измеренными методами стационарной кинетики, показывает, что сродство сукцината к Eox примерно на порядок больше, чем к Ered; для фумарата справедливо обратное соотношение, а сродство малоната слабо зависит от редокс-состояния фермента. Полученные результаты показывают, что связывание дикарбоксилатов с активным центром индуцирует изменения потенциалов редокс-компонентов фермента. Поверхностный заряд мембраны не вносит существенного вклада в энергию связывания дикарбоксилат-анионов с активным центром мембраносвязанной сукцинатдегидрогеназы.