БИОХИМИЯ, 1984, том 49, вып. 3, с. 370–380
УДК 577.152.3
Очистка и некоторые физико-химические свойства «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis
Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений, Купавна Московской области
Поступила в редакцию 02.03.1985
Аннотация
Описан 8-стаднйный метод очистки «биосинтетической» L-треониндегидратазы из пивных дрожжей Saccharomyces carlsbergensis, приводящий к 4800-кратной очистке с выходом по общей активности 34% и по общему белку 0,007%; удельная активность фермента составляла 110 мкмоль α-кетобутирата на 1 мг белка за 1 мин при дегидратировании L-треонина при pH 7,8 и 25°. Методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии DS-Na показана высокая чистота полученного препарата фермента. Молекулярный вес субъединицы определен равным 50000—55000. Методами гель-фильтрации через сефадекс G-200 и электрофореза в градиенте концентрации полиакриламидного геля молекулярный вес нативного фермента определен равным 300000. Таким образом, активный фермент представлен гексамером. Разными методами, в том числе ультрацентрифугированием, показано, что ферментный препарат содержит множественные олигомерные формы. Определен аминокислотный состав фермента. Рассчитанный молекулярный вес субъединицы равен 53800, а удельный парциальный объем 0,737 мл/г. Показано, что фермент катализирует дегидратирование L-треонина и L-серина; при насыщающей для L-треонина концентрации оптимум pH 9,5 и 9,0—9,2 соответственно. Методом смешанных субстратов показано, что дегидратирование обеих α-амино-β-оксикислот катализируется одним ферментом. Подобраны оптимальные условия сохранения активности и кинетических и аллостерических свойств фермента по крайней мере в течение 4 месяцев.